紫外分光光度計的蛋白質(zhì)的直接定量
這種方法是在280nm波長不斷創新,直接測試蛋白戰略布局。選擇Warburg 公式推廣開來,光度計可以直接顯示出樣品的濃度自行開發,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)無障礙。
由于緩沖液中存在一些雜質(zhì),一般要消除320nm 的“背景”信息快速融入,設(shè)定此功能“開”認為。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大于0.1A增強,紫外分光光度計*佳的線性范圍在1.0-1.5 之間重要意義。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”更加廣闊。
這是一個正常的現(xiàn)象規劃。事實上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%可以使用,表明結(jié)果非常穩(wěn)定進入當下。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數(shù)稍有不慎,只要吸光值有少許改變重要作用,濃度就會被放大,從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定最為顯著。
蛋白質(zhì)直接定量方法尤為突出,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)環境。紫外分光光度計直接定量法相對于比色法來說空間載體,速度快,操作簡單相對簡便;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾重要組成部分,如DNA的干擾;另外敏感度低趨勢,要求蛋白的濃度較高。